Normalizaci√≥n de una nueva variante de reacci√≥n en cadena de la polimerasa-hsp 20 (PCR-hsp20S) √ļtil para la detecci√≥n de Leishmania

Introducci√≥n: La leishmaniasis es una parasitosis producida por m√°s de 20 especies de Leishmania. La enfermedad tiene una amplia distribuci√≥n mundial en zonas tropicales y subtropicales y se presenta en tres formas cl√≠nicas fundamentales: la leishmaniasis cut√°nea, mucocut√°nea y visceral. Existen varios procedimientos de laboratorio para realizar el diagn√≥stico, pero contin√ļa la investigaci√≥n acerca de la detecci√≥n molecular del par√°sito ante la falta de consenso sobre los protocolos en uso.
Objetivos: desarrollar y normalizar una nueva reacción en cadena de la polimerasa (PCR), que amplifique un fragmento más corto del gen hsp20.
M√©todos: Se utilizaron cepas de referencia del par√°sito para realizar la normalizaci√≥n de un nuevo ensayo de PCR que amplifica un fragmento corto del gen que codifica para la peque√Īa prote√≠na de 20 Kda. Se evaluaron las cantidades y concentraciones √≥ptimas del ensayo, la sensibilidad anal√≠tica para L. braziliensis, la especificidad anal√≠tica as√≠ como la repetibilidad, y se evalu√≥ su desempe√Īo con cepas de referencia.
Resultados: Se determinaron las condiciones óptimas de amplificación de la nueva PCR-hsp20S, y se demostró que amplifica las principales especies de importancia médica. La sensibilidad analítica resultó en 100 fg para L. braziliensis.
Conclusiones: Las condiciones establecidas garantizan un buen desempe√Īo de esta propuesta de PCR, y la sensibilidad anal√≠tica y especificidad obtenidas permiten evaluar su desempe√Īo para el diagn√≥stico utilizando muestras cl√≠nicas. Las condiciones de este protocolo, sensibilidad y especificdad y otros par√°metros establecidos permiten recomendar su evaluaci√≥n para su posible uso diagn√≥stico.

Ana Margarita Montalvo, Jorge Fraga, Lisandra √Ālvarez, Annia Alba, Cecia Torres
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Leishmania y leishmaniasis. Veinte a√Īos de estudio en el Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kour√≠": aportes y perspectivas

Introducci√≥n: la leishmaniasis es una enfermedad parasitaria causada por varias especies del g√©nero Leishmania, protozoo par√°sito que no circula en Cuba de forma aut√≥ctona. Sin embargo, se presentan casos importados. Existen tres formas cl√≠nicas principales y diversos m√©todos para realizar el diagn√≥stico, que incluyen los parasitol√≥gicos, serol√≥gicos y m√°s recientemente, los moleculares. El tratamiento de elecci√≥n son los antimoniales pentavalentes, los cuales presentan inconvenientes que han estimulado la b√ļsqueda de nuevas alternativas terap√©uticas.
Objetivos: resumir los resultados de trabajo obtenidos en el estudio de Leishmania durante 20 a√Īos y explicar las razones que motivaron la capacitaci√≥n, entrenamiento e investigaci√≥n de esta entidad en el Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kour√≠".
M√©todos: se realiz√≥ un estudio bibliom√©trico y se analizaron todos los resultados de trabajo del grupo de Leishmania del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kour√≠" durante 20 a√Īos. Se consultaron todas las publicaciones realizadas en el grupo y se determinaron los resultados fundamentales en las principales l√≠neas de investigaci√≥n.
Resultados: se describen los aportes m√°s importantes en √°reas de investigaci√≥n como la inmunizaci√≥n con ADN, el diagn√≥stico molecular y la b√ļsqueda de nuevas alternativas terap√©uticas, y se remite al lector a consultar las publicaciones que contienen los detalles de cada estudio. Se mencionan las colaboraciones principales con centros nacionales y extranjeros. Se comentan las perspectivas futuras del trabajo del grupo de investigaci√≥n.
Conclusiones: el grupo ha acometido l√≠neas de investigaci√≥n de inter√©s y es responsable del mayor aporte del pa√≠s en el campo de investigaci√≥n de este par√°sito, en correspondencia con su misi√≥n. La continuidad de la investigaci√≥n, contribuir a la soluci√≥n de algunos de los problemas a√ļn no resueltos de esta parasitosis y la aplicaci√≥n de los resultados obtenidos, ser√° un reto para los pr√≥ximos a√Īos.

Ana Margarita Montalvo √Ālvarez, Lianet Monzote Fidalgo
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Actividad in vitro contra Leishmania y permeación en piel humana de liposomas ultradeformables de miltefosina

Introducción: los liposomas ultradeformables de miltefosina (LUD-MIL) constituyen una opción para el tratamiento tópico en leishmaniasis cutánea penetrando los estratos de la piel hasta la dermis, sitio donde habita el parásito.
Objetivo: dise√Īar LUD-MIL y determinar su actividad contra L. (Viannia) panamensis y L. (V.) braziliensis y la permeaci√≥n en piel humana.
Métodos: los LUD-MIL, liposomas convencionales de fosfatidilcolina (LConv) y LUD-MIL-fluorescente (LUD-MIL-Fluo) fueron preparados por el método de rehidratación de película lipídica. Se caracterizaron fisicoquímicamente y se determinaron: la liberación en membrana semisintéticas, la retención en las capas de la piel y la permeación en piel humana. La citotoxicidad en THP-1 fue determinada por el ensayo colorimétrico de MTT y la actividad en promastigotes y amastigotes intracelulares por recuento microscópico.
Resultados: el tama√Īo, √≠ndice de polidispersi√≥n, potencial Z y concentraci√≥n de fosfol√≠pidos de los LUD-MIL fue de 100,7 nm, 0,147, -12,0 mV y 53,24 mM respectivamente. El flujo de MIL a trav√©s de la membrana fue mayor con LUD-MIL que con MIL-libre. El tratamiento con LUD-MIL indujo menor acumulaci√≥n de la MIL en el estrato corneo y mayor permeaci√≥n que el tratamiento con MIL libre. Los LUD-MIL y los LConv-MIL mantuvieron la actividad de la MIL en los par√°sitos y c√©lulas. Los LUD-MIL fueron m√°s t√≥xicos para las c√©lulas que los LConv y la MIL y m√°s activos en amastigotes intracelulares de L. (V.) braziliensis.
Conclusión: los LUD-MIL preparados conservaron la actividad anti-Leishmania de la MIL y permitieron la liberación del compuesto en membranas y piel humana. Ensayos en modelos experimentales de leishmaniasis cutánea para evaluar la actividad de estas formulaciones son urgentes de realizar.

Indira Paola Hernandez, Jorge Aníbal Martinetti Montanari, Patricia Escobar Rivero
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¬ŅLeishmaniasis o psoriasis? Diagn√≥stico diferencial

Introducción: la leishmaniasis es una enfermedad parasitaria causada por varias especies del género Leishmania, que se presenta en formas clínicas muy diversas. Entre las formas cutáneas, se ha notificado ocasionalmente la leishmaniasis psoriasiforme. Es imprescindible tener la certeza diagnóstica de leishmaniasis dada la toxicidad y los efectos colaterales que tienen las drogas de primera línea para tratarla. Se emplean varios métodos para llegar al diagnóstico, como son desde la identificación del parásito en el tejido hasta la detección de su ADN.
Métodos
: se realizó la recopilación y análisis de la información de un caso clínico con supuesta leishmaniasis, y se aplicaron distintos métodos de laboratorio para definir el diagnóstico, tales como examen parasitológico directo, examen histopatológico, cultivo y reacción en cadena de la polimerasa (PCR-18S y PCR-hsp70).
Resultados y discusión: los exámenes realizados para confirmar el diagnóstico de leishmaniasis fueron negativos. Al estudio histológico, la lesión dermatológica se concluye como psoriasis.
Conclusiones: aunque la literatura científica notifica casos de leishmaniasis de tipo psoriasiforme estos son escasos. El estudio integral del caso por diferentes métodos descartó la supuesta leishmaniasis en este paciente, lo cual permitió la aplicación del tratamiento adecuado y evitó el uso indebido de antimoniales para su tratamiento.

Ana Margarita Montalvo Alvarez, Orestes Blanco González, Virginia Capó de Paz, Jorge Fraga Nodarse, Lianet Monzote Fidalgo
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